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全民ART时代来临,有哪些是你不知道的?
时间:2022-03-23 浏览次数:

3月11日,国家卫健委消息,为进一步优化新冠病毒检测策略,服务疫情防控需要,经研究,国务院应对新型冠状病毒肺炎疫情联防联控机制综合组决定在核酸检测基础上,增加抗原检测作为补充,并组织制定了《新冠病毒抗原检测应用方案(试行)》。


消息一出,朋友圈轰轰烈烈地被“抗原自检”一词霸屏,抗原检测正式加入防疫战线,开启全民ART时代。


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很多人或许对于抗原检测并不是很了解,今天我们就来捋一捋这些检测手法之间有何区别。

一般检查病毒是否入侵人体,主要的检测方法有三种,分别是核酸检测、抗原检测和抗体检测,前二者属于直接检测病原体的方法。

我们先对几个检测名词做下介绍:

◉ 核酸检测:检测的是病毒的遗传物质,如DNA或RNA。如果检测结果为阳性,说明病毒的遗传物质存在于患者体内,患者正处于感染期,可直接确诊为感染病例;

◉ 抗原检测:检测的是病毒的组成蛋白。如果操作规范检测结果为阳性,说明患者体内含有病毒的组成成分,患者正处于感染期。

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(图片来源上观新闻)


◉ 抗体检测:检测的是患者体内免疫系统为应对病毒感染而产生的特异性蛋白。如果检测结果为阳性,说明患者体内存在针对该病毒的抗体,患者正处于感染期或已经康复,可作为辅助手段帮助确诊感染。


目前该检测随着新冠疫苗接种的普及和接种率的提高,已逐渐退出舞台,被中和抗体检测所取代;


这三种检测方法的窗口期也是有区别的:

① 人在病毒感染后,病毒中的遗传物质会迅速扩增,在发病早期即可被检测到;

② 随后病毒的抗原蛋白被大量表达,在患者体内含量快速达到峰值;

③ 在发病后的7-14天内,患者体内免疫系统开始先后产生应对病毒的IgM和IgG抗体,其中IgM会在较短时间内消失,而IgG会长时间存在于患者体内。



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(新冠病毒检测方法的窗口期示意图)


从上图我们可以看到在感染早期,核酸/抗原的产生早于抗体,诊断的窗口期更短。并且核酸/抗原的产生不像抗体那样易受宿主免疫状态的影响,可用于免疫虚损人群。除此之外,核心抗原摩尔数与核酸拷贝数遵循正相关关系,因此,检测核心抗原的临床价值和核酸重叠,即,都是病毒复制的直接指标。


下面我们重点来说说【核酸检测】和【抗原检测】之间到底是怎么如何检测的?


「核酸」检


自新冠疫情发生以来,“核酸检测”一词变成了我们生活中的高频词,大家对它或多或少都有所了解。


核酸检测依然是目前用来确诊新冠病毒感染的“金标准”,具有早期诊断、灵敏度和特异性高等特点。



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(图片来源网络)


核酸检测使用最广泛的是实时荧光定量RT-PCR技术。检测的靶标序列一般是指高度保守的 ORF1ab 基因、核衣壳蛋白 N 基因、包膜蛋 白 E 基因和刺突糖蛋白 S 基因。依据《新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术指南》SARS-CoV-2 扩增位置常见于 ORF1ab 和 N基因两个靶标。同一份标本需满足双靶标阳性或重复检测为单靶标阳性或两种标本同时满足单靶标才能确认SARS-CoV-2病毒核酸阳性。


01  核酸检测的原理


以新冠病毒独特的基因序列为检测靶标。在检测过程中,先采用RT-PCR技术将新冠病毒的核酸(RNA)逆转录为对应的cDNA;再采用荧光定量PCR技术,将得到的DNA进行大量复制,同时,使用特异性探针对复制过程中的DNA进行检测,打上标记。如果检测样本中存在新冠病毒核酸,仪器就可以捕捉到荧光信号,并且随着DNA的不断复制,荧光信号不断增强,这样就间接检测到了新冠病毒的存在。


如果样本中没有病毒,由于没有靶基因的扩增,也就捕捉不到荧光信号增强。所以,核酸检测其实就是通过检测荧光信号的累积来确定样本中是否有病毒核酸。

02  五个步骤检测新冠病毒

核酸检测程序需要经过五个步骤,样本采集、提取RNA、RT成cDNA,PCR扩增、结果分析,这一过程需要专业人员在特定的实验室和高灵敏的检测设备进行严谨的实验操作才能完成。


「抗原」检测


抗原检测并不是一项新出的技术,而是被广泛应用于人类及动物的传染病检测中。最常见的就是早早孕,乙肝两对半、HIV检测试剂。


01  抗原检测原理

新冠病毒有四种主要的结构蛋白:刺突蛋白(S蛋白),核衣壳蛋白(N蛋白),膜蛋白(M蛋白)和包膜蛋白(E蛋白),可作为免疫原,在病毒感染人体后,刺激浆细胞产生特异性抗体。

依据双抗体夹心法的原理,样本滴加在样本垫上,通过液相层析依次通过结合垫,NC膜上的检测线(T线)和质控线(C线)。结合垫内含有标记的抗原特异性抗体,可以与样本中的抗原(病毒蛋白)发生结合,当液流到达检测线(T线)时,固定在这条线上的第二种抗原特异性抗体再次与抗原结合,将会呈现阳性结果。质控线(C线)包被IgG抗体,可以结合样本垫中抗体,用于判断层析过程是否顺利。


目前已经批准的抗原检测产品,多是以新冠病毒N蛋白作为抗原检测的靶标,使用特异结合新冠N蛋白的抗体去抓取病毒,再通过生化反应把抓取的信号放大到能肉眼观测的程度。


02  四个步骤检测新冠病毒

1. 采集样本,将样本处理液滴至标本处理管中;

2. 将取样拭子搅拌并挤压管壁,使标本充分洗脱至处理液中;

3. 取出检测卡,向加样孔中加样;

4. 等待15分钟,判读结果。


“抗原筛查,核酸诊断”


新冠病毒的核酸、抗体、抗原检测各有侧重,不能相互替代。

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(图片来源国家卫健委临检中心)


核酸检测的优点显而易见,灵敏度、高特异性强。当然缺点也是显而易见的,操作复杂,需由医护人员采样。采样后,需要专业的检验人员使用PCR仪进行检测,周期较长。

而抗原检测的优势在于检测速度快,操作简便,无需实验室和检测设备等。抗原检测的局限性在于相对核酸检测由于没有扩增过程,导致敏感性偏低,并且覆盖病程短,一般在感染的第3-7天检测比较灵敏,对于病毒载量较低及无症状人群检测灵敏度不够。根据《新冠病毒抗原检测应用方案(试行)》,抗原阳性结果可用于对疑似人群的早期分流和快速管理,但不作为新冠病毒感染的确诊依据。

2021年以来,抗原检测已经活跃在欧美等多个国家和地区,在大范围普筛自查中起到了重要作用。

3月18日,国家卫健委发布推广“抗原筛查、核酸诊断”的监测模式。将分子生物和免疫水平检测相结合,发挥各自优势,分层检测。隔离观察人员,有疑似症状人群及有抗原自检需求的人群可用抗原检测作为快速筛查几次,一旦阳性,应及时再去做核酸检测确认,两种方法同步进行,有利于提高早发现能力,提高监测预警灵敏度,降低检测成本,为各种可能的风险人群提供双重保障。

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